1、什么是定標(生化儀測定原理)朗伯-比爾定律是生化儀的理論基礎(chǔ)，樣本+試劑進行反應，測得的是吸光度(A)，需要轉(zhuǎn)化成濃度(或者活力單位)才有臨床意義。因此需要建立濃度(或活力單位)和吸光度之間的關(guān)系。定標，即測定已知濃度(或活力單位)的校準品，根據(jù)生化儀測得的吸光度，進行擬合，得到濃度和吸光度之間的關(guān)系曲線---校準曲線，將樣本+試劑反應的吸光度帶入校準曲線，就可以得到濃度。(如下圖所示)

　　2、生化試劑的相關(guān)基礎(chǔ)(上機要點)參數(shù)設置內(nèi)容：波長(主副波長)，反應時間、樣品量、試劑量、讀點時間、反應方向、分析方法、校準方法、校準濃度等。3、生化反應的監(jiān)測根據(jù)反應類型的不同，曲線被分為反應曲線、校準曲線等。(下圖是反應曲線示例)

　　反應曲線的縱坐標為吸光度值，橫坐標為反應時間。反應時間即測光點，當一個反應杯通過一次光度計光路時，就會被測定一次吸光度，兩次通過光路的間隔就是一次讀點時間，也可以說反應盤旋轉(zhuǎn)一圈所用的時間。反應曲線是反應監(jiān)測的主要信息內(nèi)容。在反應曲線上能看到樣品、試劑加入時的時間、對應吸光度。除反應曲線監(jiān)測外，平時還有試劑空白監(jiān)測，查看試劑空白吸光度。校準曲線是反映校準的過程，并為計算結(jié)果提供依據(jù)。校準曲線根據(jù)校準方法分為線性曲線和非線性曲線兩種;根據(jù)校準點的多少分為單點線性曲線和多點線性非線性曲線。(下圖是校準曲線)

　　校準曲線的縱坐標是吸光度軸，橫坐標是濃度軸。線性曲線有一點或多點，過零點和不過零點多種。非線性曲線一般都是多點，有樣條曲線(Spline)、對數(shù)曲線(Logit-Log3P、Logit-Log4P、Logit-Log5P)、函數(shù)曲線、折線曲線等。在參數(shù)正確的情況下，校準曲線的每個點是校準品和相應試劑反應后的結(jié)果。校準曲線結(jié)果與校準方法的選擇，會直接影響結(jié)果的準確和穩(wěn)定。4、定標影響因素①重復性不好校準品沒有混勻或者試劑穩(wěn)定性較差，可通過精密度實驗排查原因。②校準類型根據(jù)校準品濃度和吸光度之間呈現(xiàn)的關(guān)系，選擇合適的校準類型。如果校準品濃度和吸光度呈線性關(guān)系，則不建議使用樣條函數(shù)擬合;Logit雙對數(shù)函數(shù)3P、4P、5P，雖然都是“收斂型”函數(shù)，但是收斂程度不一樣，根據(jù)收斂程度確定合適的雙對數(shù)函數(shù)校準類型。③校準品濃度校準品濃度如果設置不合理，有可能擬合結(jié)果較差，導致點不在校準曲線上，定標回測較差。