1、什么是定標(biāo)(生化儀測(cè)定原理)朗伯-比爾定律是生化儀的理論基礎(chǔ)，樣本+試劑進(jìn)行反應(yīng)，測(cè)得的是吸光度(A)，需要轉(zhuǎn)化成濃度(或者活力單位)才有臨床意義。因此需要建立濃度(或活力單位)和吸光度之間的關(guān)系。定標(biāo)，即測(cè)定已知濃度(或活力單位)的校準(zhǔn)品，根據(jù)生化儀測(cè)得的吸光度，進(jìn)行擬合，得到濃度和吸光度之間的關(guān)系曲線(xiàn)---校準(zhǔn)曲線(xiàn)，將樣本+試劑反應(yīng)的吸光度帶入校準(zhǔn)曲線(xiàn)，就可以得到濃度。(如下圖所示)

　　2、生化試劑的相關(guān)基礎(chǔ)(上機(jī)要點(diǎn))參數(shù)設(shè)置內(nèi)容：波長(zhǎng)(主副波長(zhǎng))，反應(yīng)時(shí)間、樣品量、試劑量、讀點(diǎn)時(shí)間、反應(yīng)方向、分析方法、校準(zhǔn)方法、校準(zhǔn)濃度等。3、生化反應(yīng)的監(jiān)測(cè)根據(jù)反應(yīng)類(lèi)型的不同，曲線(xiàn)被分為反應(yīng)曲線(xiàn)、校準(zhǔn)曲線(xiàn)等。(下圖是反應(yīng)曲線(xiàn)示例)

　　反應(yīng)曲線(xiàn)的縱坐標(biāo)為吸光度值，橫坐標(biāo)為反應(yīng)時(shí)間。反應(yīng)時(shí)間即測(cè)光點(diǎn)，當(dāng)一個(gè)反應(yīng)杯通過(guò)一次光度計(jì)光路時(shí)，就會(huì)被測(cè)定一次吸光度，兩次通過(guò)光路的間隔就是一次讀點(diǎn)時(shí)間，也可以說(shuō)反應(yīng)盤(pán)旋轉(zhuǎn)一圈所用的時(shí)間。反應(yīng)曲線(xiàn)是反應(yīng)監(jiān)測(cè)的主要信息內(nèi)容。在反應(yīng)曲線(xiàn)上能看到樣品、試劑加入時(shí)的時(shí)間、對(duì)應(yīng)吸光度。除反應(yīng)曲線(xiàn)監(jiān)測(cè)外，平時(shí)還有試劑空白監(jiān)測(cè)，查看試劑空白吸光度。校準(zhǔn)曲線(xiàn)是反映校準(zhǔn)的過(guò)程，并為計(jì)算結(jié)果提供依據(jù)。校準(zhǔn)曲線(xiàn)根據(jù)校準(zhǔn)方法分為線(xiàn)性曲線(xiàn)和非線(xiàn)性曲線(xiàn)兩種;根據(jù)校準(zhǔn)點(diǎn)的多少分為單點(diǎn)線(xiàn)性曲線(xiàn)和多點(diǎn)線(xiàn)性非線(xiàn)性曲線(xiàn)。(下圖是校準(zhǔn)曲線(xiàn))

　　校準(zhǔn)曲線(xiàn)的縱坐標(biāo)是吸光度軸，橫坐標(biāo)是濃度軸。線(xiàn)性曲線(xiàn)有一點(diǎn)或多點(diǎn)，過(guò)零點(diǎn)和不過(guò)零點(diǎn)多種。非線(xiàn)性曲線(xiàn)一般都是多點(diǎn)，有樣條曲線(xiàn)(Spline)、對(duì)數(shù)曲線(xiàn)(Logit-Log3P、Logit-Log4P、Logit-Log5P)、函數(shù)曲線(xiàn)、折線(xiàn)曲線(xiàn)等。在參數(shù)正確的情況下，校準(zhǔn)曲線(xiàn)的每個(gè)點(diǎn)是校準(zhǔn)品和相應(yīng)試劑反應(yīng)后的結(jié)果。校準(zhǔn)曲線(xiàn)結(jié)果與校準(zhǔn)方法的選擇，會(huì)直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確和穩(wěn)定。4、定標(biāo)影響因素①重復(fù)性不好校準(zhǔn)品沒(méi)有混勻或者試劑穩(wěn)定性較差，可通過(guò)精密度實(shí)驗(yàn)排查原因。②校準(zhǔn)類(lèi)型根據(jù)校準(zhǔn)品濃度和吸光度之間呈現(xiàn)的關(guān)系，選擇合適的校準(zhǔn)類(lèi)型。如果校準(zhǔn)品濃度和吸光度呈線(xiàn)性關(guān)系，則不建議使用樣條函數(shù)擬合;Logit雙對(duì)數(shù)函數(shù)3P、4P、5P，雖然都是“收斂型”函數(shù)，但是收斂程度不一樣，根據(jù)收斂程度確定合適的雙對(duì)數(shù)函數(shù)校準(zhǔn)類(lèi)型。③校準(zhǔn)品濃度校準(zhǔn)品濃度如果設(shè)置不合理，有可能擬合結(jié)果較差，導(dǎo)致點(diǎn)不在校準(zhǔn)曲線(xiàn)上，定標(biāo)回測(cè)較差。